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閱讀次數:1416 發布時間:2012/9/11 9:21:05
可塑性成年細胞的分化可能有巨大的治療潛力,但在同一時間,它的特點是發展的嚴重的病理狀態,如癌癥和纖維化。在這項研究中,我們報告中的應用無創性系統的實時動態監測細胞的可塑性。分析細胞阻抗剖面記錄細胞指數使用實時細胞分析儀發現其顯著增加治療后前列腺上皮細胞的轉化生長因子-β1。變化的細胞指數剖面平行細胞骨架改建和誘導上皮細胞–間過渡和細胞增殖的負相關。這種新穎的應用這種方法表現出極大的潛力的阻抗為基礎的系統的無創性和實時監測細胞的命運。
關鍵詞:實時細胞分析細胞可塑性上皮間質轉型- -–轉化生長因子-β1 - F -肌動蛋白細胞骨架重構
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景區簡介
這一現象的可塑性成年細胞的分化可能有巨大的治療潛力,但在同一時間,它的特點是嚴重的病理狀態惡化。上皮間過渡–(IMT)是一個關鍵過程的胚胎發育,但它也發生在進展腫瘤來源于上皮細胞(審查,見(1))。轉化生長因子- 1(ββ轉化生長因子- 1)是一個重要的生長因子誘導重塑的上皮細胞。轉化生長因子-β1誘導一個復雜的變化的基因表達譜,從而導致誘導細胞周期阻滯,增加細胞遷移,擴散(2–4)。一般來說,確定質量和數量的重構的上皮細胞是一個復雜的問題。它通常包括定量表達的上皮細胞和間質標記(E -鈣粘蛋白,神經鈣粘著蛋白,波形蛋白和),可視化骨架重建(F),遷移,入侵檢測(傷口愈合和移民通過基底膜基質;(5))。傳統上,大多數的方法是根據費時終點狀態分析整個細胞群,結合的技術分析單個細胞,利用流式細胞儀或數字顯微技術和圖像分析。然而,無論是情節和空間分辨率這些技術能夠登記非常小的、快速的細胞形態的變化。目前,標記和無創性方法的基礎上的電子傳感器陣列細胞提出了監測細胞生理學,尤其是粘附,傳播,和瞬態變化,細胞形態(6–9)。廣泛接受這一方法,正確和準確地解釋這些數據的測量是至關重要的獲得精確的相關性細胞形態和表型相關的整體使用參考方法。然而,良好的描述模型應用這一方法,不同的細胞系和各種細胞的可塑性調節的條件是失蹤。在這里,我們表明,阻抗為基礎的實時細胞分析儀(美)允許動態監測和定量細胞重塑在轉化生長因子- 1在β上皮轉化前列腺上皮細胞。這種新穎的應用這種方法表現出極大的中型吞吐量潛力的阻抗為基礎的系統的無創性和實時監測細胞的命運。
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材料與方法
細胞的
1細胞取自德國微生物和細胞培養和培養在1640培養,輔以20%胎牛血清(兩部分),5 µ克/毫升5毫微克/毫升的轉鐵蛋白,亞,和5 µ克/毫升胰島素(公司)。該細胞系培養情報(熱費科學)培養瓶,盤菜,在加濕的孵化器在37攝氏°大氣中5%的二氧化碳。
實時細胞阻抗分析
協會e-plates®96被用于無創實時測量與使用一個xcelligence時系統包括一軟件版本1.1(包括羅氏)。,標準的背景進行測量是利用100μ我完整的栽培介質。1細胞培養,量化,和種子中額外的100μ我種植媒體在終濃度為30000細胞每平方厘米。細胞不斷監測每1分鐘在個45分鐘后播種,每1小時為96小時內重組轉化生長因子-β1(微孔)處理不同濃度一式三份進行24小時后播種的細胞。形成收縮微絲阻斷細胞松弛素乙(炭黑),用dematioideum(calbiochem)溶解在甲醇
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