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恒遠敘述酸性磷酸酶重氮鹽后偶聯(lián)法

閱讀次數(shù):1371   發(fā)布時間:2013/7/29 9:39:25

酸性磷酸酶重氮鹽后偶聯(lián)法:
 
    與堿性磷酸酶相同。重氮化和偶聯(lián)反應多在堿性溶液中和低溫條件下進行。在酸性溶液中容易分解。所以酶作用與偶聯(lián)反應分兩步進行。
 
    1)孵育液配制
    磷酸—6—苯酰-2-萘鈉         25rug
    蒸餾水                       80ml
    Wapoll醋酸緩沖液(pH 5.0)    20ml
    氯化鈉                       2g
    重氮鹽溶液配制:
    堅牢藍B鹽                   50rug
    蒸餾水                       50ml
    加碳酸氫鈉使之堿化。
 
    2)染色程序:
    ①用新鮮或冷福爾馬林固定的組織進行恒冷箱切片:
    ②切片人孵育液中,室溫孵育10—60分鐘(新鮮組織切片),或1~2小時(固定后組織切片);
    ③新鮮組織切片用冷生理鹽水洗3次,固定后的組織切片用蒸餾水洗3次;
    ④放人新鮮配制的冷重氮液中,攪動3~5分鐘;
    ⑤用冷生理鹽水或蒸餾水洗3次,每次5分鐘;
    ⑥甘油明膠封固。
 
    3)結果:酶活性部位顯示藍色。
 
    4)對照實驗:與鉛法相同。

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